Việt Nam | English Tin tức Hướng dẫn Tuyển dụng Trợ giúp Câu hỏi Quy định |HRM
  Trang chủ   Sitemap   Liên hệ
Sản phẩm
Hỗ trợ trực tuyến
Sales (0241.6263.679)
Ý kiến thăm dò
Bạn quan tâm đến sản phẩm nào của chúng tôi nhất ?
Thuốc lá lá
Hoa cây cảnh
Sản phẩm nhựa
Sản phẩm nông nghiệp khác
Thống kê truy cập
Số người đang online: 8
Số lượt truy cập: 3260
  Giá vàng
  Thời tiết
  Tỷ giá ngoại tệ
  Chứng khoán
  Kết quả xổ số
  Lịch phát sóng
Liên kết website
Vacuolar transport of nicotine is mediated by a multidrug and toxic compound extrusion (MATE) transporter in Nicotiana tabacum
Tin tức
Vacuolar transport of nicotine is mediated by a multidrug and toxic compound extrusion (MATE) transporter in Nicotiana tabacum
  1. Laboratory of Plant Gene Expression, Research Institute for Sustainable Humanosphere, Kyoto University, Gokasho, Uji 611-0011, Japan;
    bLaboratory of Membrane Biochemistry, Okayama University Graduate School of Medicine, Dentistry, and Pharmaceutical Sciences, Okayama 700-8530, Japan;

 

 

cDepartment of Plant Systems Biology, Flanders Institute for Biotechnology, and Department of Plant Biotechnology and Genetics, Ghent University, 9052 Gent, Belgium; and

dVTT Technical Research Centre of Finland, Tietotie 2, FIN-02044 VTT, Espoo, Finland

  1. Contributed by Marc C. E. Van Montagu, December 12, 2008

  2. 1M.M. and N.S. contributed equally to this work. (received for review July 16, 2008)

  1. Fig. 1.

    Isolation of Nt-JAT1 as a MeJA-inducible transporter gene. (A) Average linkage hierarchical clustering of MeJA-modulated gene tags identified by cDNA-AFLP (5). The time points (h) are indicated at the top. Red boxes reflect transcriptional activation relative to the average expression level in control (DMSO) cells. Gray boxes correspond to missing time points. (B) qRT-PCR of PMT (top) and Nt-JAT1 (bottom) in BY-2 cells treated with MeJA. RNA helicase was used as control gene. (C) RNA gel blot analysis of Nt-JAT1 in tobacco seedlings, harvested 0 to 72 h after MeJA treatment. Total RNA (7.5 μg) was probed with a 32P-labeled Nt-JAT1 fragment (top). Loading controls are shown by EtBr-stained 18S rRNA (bottom).

  2. Fig. 2.

    Expression of Nt-JAT1 in tobacco plants. (A) Nt-JAT1 expression in response to various treatments. Fourteen-day-old seedlings were treated for 24 h with 10 μM 1-naphthaleneacetic acid (NAA), 10 μM IAA, 10 μM 6-benzyladenine (BA), 10 μM abscisic acid (ABA), 10 μM gibberellic acid (GA3), 5 μM brassinolide (BL), 100 μM MeJA, 100 μM salicylic acid (SA), 100 μM sclareol (SC), at 4 °C (cold)/low light, dark (dark), and drought (dry). Cont., untreated control. Total RNA (7.5 μg) prepared from aerial parts of seedlings was probed with a 32P-labeled Nt-JAT1 fragment (top). Loading controls are shown by EtBr-stained 18S rRNA (bottom). (B) Organ-specific expression of Nt-JAT1 in tobacco. Total RNA (7.5 μg) prepared from tobacco organs was probed with 32P-labeled Nt-JAT1 fragment (0.5 kb) (top). The amount of total RNA applied to each lane is shown by EtBr-stained 18S rRNA (bottom).

  3. Fig. 3.

    Membrane localization of Nt-JAT1 in tobacco leaves. Microsomes from tobacco leaves were fractionated with a noncontinuous gradient consisting of 0%, 20%, 30%, 34%, 38%, and 45% (wt/vol) sucrose. Membrane fractions were collected from the interfaces between different sucrose concentrations. Proteins from each interface were subjected to electrophoresis, blotted, and immunodetected with anti-Nt-JAT1 antibodies. Blots were reprobed with antibodies raised against plasma membrane (PM) H+-ATPase, vacuolar membrane (VM) V-PPase, and endoplasmic reticulum (ER) BiP.

  4. Fig. 4.

    Nt-JAT1-mediated nicotine transport in yeast cells. (A) Nicotine accumulation in yeast cells. Control (white bars) or Nt-JAT1-expressing (black bars) yeast cells were incubated in half-strength SD medium, including nicotine at the indicated concentrations for 6 h. Results are mean ± SD of duplicates. Asterisks indicate statistically significant difference compared to control (Student''s t test; *, P < 0.01; **, P < 0.001; ***, P < 0.0001). (B) Time course analysis of nicotine transport in Nt-JAT1-expressing yeast cells. Control (open circles) or Nt-JAT1-expressing (filled circles) yeast cells were incubated in half-strength SD medium supplemented with 1 mM nicotine, and sampled at the times indicated. Results are mean ± SD of duplicates. Asterisks indicate statistically significant difference compared with control (Student''s t test; *, P < 0.01; **, P < 0.001; ***, P < 0.0001). (C) Localization of Nt-JAT1-GFP to yeast plasma membranes. Yeast cells expressing Nt-JAT1-GFP were grown at 30 °C to the logarithmic growth phase and observed by fluorescence microscopy. (i) Fluorescence of yeast cells transformed with Nt-JAT1-GFP; (ii) bright-field contrast. (Scale bar, 5 μm.) (D) Functionality of Nt-JAT1-GFP in yeast cells. Nicotine content in control (white bar), Nt-JAT1-expressing (black bar) or Nt-JAT1-GFP-expressing (gray bar) yeast cells incubated in half-strength SD medium including nicotine for 12 h. Results are mean ± SD of duplicates. Asterisks indicate statistically significant differences (ANOVA Bonferroni test; *, P < 0.01).

  5. Fig. 5.

    Characterization of Nt-JAT1 in proteoliposomes. (A) Time course of TEA uptake. The reaction was started by adding radioactive TEA to a final concentration of 50 μM in the presence (filled circles) or absence (open circles) of ATP at 2 mM. Proteoliposomes without Nt-JAT1 were used as a negative control (mock). Inset: Nt-JAT1 expressed and purified from Sf9 cells. Samples at each purification step were solubilized and applied to 11% polyacrylamide gels, and subjected to electrophoresis. Proteins were visualized by Coomassie Brilliant Blue staining (CBB). The position of Nt-JAT1 was marked by an arrowhead. Lane 1, membrane protein containing T401; lane 2, purified Nt-JAT1. (B) Effects of various inhibitors on TEA uptake. The requirement of a membrane potential or pH gradient for TEA uptake was examined with and without 1 mM NaN3, 2 mM (NH4)2SO4, 2 μM valinomycin, 2 μM nigericin, or both 2 μM valinomycin and 2 μM nigericin. Reconstituted vesicles were preincubated with the inhibitors before the addition of TEA. The 100% control corresponds to 0.92 nmol TEA/mg protein at 5 min. Results are mean ± SD of 3 replicates.

 

Ý kiến hản hồi
     
   
Email :
 
Nội dung :
 
Mã xác nhận
 
   
 

Tin khác
 
   Video
   Thông tin tài chính
  NQ14-2018
  BCTC quý 2 - 2018
  BC quản trị 6 tháng đàu 2018
  BB họp ĐHĐCĐ 2017
  NQ 157 28-3-2018
  NQ xin phê duyệt KHSXKD 2017
  NQ - Qui chế hoạt động HDQT
  BCTC bán niên 2017
  Nghị quyết 80 HĐQT 2017
  NQ 493/NQ-NSC 20/8/18
  BCTC bán niên 2018
  NQ 451 ĐHĐCĐ 2017
  Nghị quyết ĐHĐCĐ thường niên 2018
  BCTC Quý 1 - 2018
  NQ 564 phiên họp thường kỳ Q2-2017
  Báo cáo thường niên 2017
  NQ 638 sắp xếp lại cơ cau tổ chức công ty
  BCTC năm 2017 ( R )
  BCTC Q3-2108
  NQ 394 ngày 27/6/2018
  NQ 604 ngày 23/10/2018
   Tin tức
  Nội bộ
  Tin liên quan
  Hợp tác
  Đoàn thể
  Thông báo
  Ứng dụng
  Văn bản
   Tin nổi bật
 Kỷ niệm 25 năm thành lập và Khánh thành Phân xưởng sợi thuốc lá.
 Thông báo mời họp Đại hội đồng cổ đông thường niên năm 2018 Công ty Cổ phần Ngân Sơn
 KỶ NIỆM 10 NĂM THÀNH LẬP ĐẢNG BỘ TỔNG CÔNG TY THUỐC LÁ VIỆT NAM
 Thứ trưởng Bộ Công thương thăm và làm việc tại Công ty Cổ phần Ngân Sơn
 Hội nghị đại biểu người lao động 2016 Công ty cổ phần Ngân Sơn; Đoàn kết - Dân chủ và Trách nhiệm
 Công ty Cổ phần Ngân Sơn tổ chức Đại hội Đảng lần thứ V, nhiệm kỳ 2015-2020
 Bắc Kạn: Sơ kết 3 năm phát triển vùng nguyên liệu thuốc lá
 Công ty Cổ phần Ngân Sơn tổ chức Lễ kỷ niệm 20 năm thành lập và đón nhận các phần thưởng cao quý của Nhà nước và Chính phủ
 Xung lực mới cho phát triển
 Lễ khánh thành Dây chuyền đồng bộ sơ chế tách cọng nguyên liêu thuốc lá công suất 24.000 tấn/năm
 Nâng cao vị thế bằng thực hiện trách nhiệm xã hội
 Công ty Cổ phần Ngân Sơn – Đầu tư toàn diện
   Góc giải trí
Thuốc lá thuốc lào
Chàng ngốc nói chữ
Lời nguyền
Mày để cho nó một chút
   Đối tác

Copyright © 2006 - Ngan Son Joint Stock Company
Office: Tien Son Industry Zone, Bac Ninh Pro * Tel: 84222.6263679 Fax: 84222.6263686
http://muathu7.vn http://igf.com.vn